История клинического анализа ядросодержащих клеток крови (часть 1)

date19.08.2014 "Анализ крови: вчера, сегодня, завтра" authorАвтор: К. А. Лебедев

Толчком для разработки подавляющего большинства клинических методов являлось возникновение в той или иной области определенного фундамента знаний и теоретическое обобщение этих знаний. В свою очередь, данные, получаемые с помощью созданных методов, приносили новые знания и являлись материалом как для дальнейшего теоретического развития направления, так и для конкретных выводов и находок, важных для практики.

Анализ ядросодержащих клеток крови является исключением из этих правил. Данный метод сначала был разработан, затем было обнаружено его клиническое приложение, и уже после этого пришло теоретическое обоснование истинной сути выявляемых с его помощью изменений. История этого анализа полна парадоксов и неожиданностей.

Обратим внимание читателя на то, что уже с первых лет возникновения анализа крови стало ясно, а к настоящему времени — четко доказано, что все типы лейкоцитов имеют непосредственное отношение к основной иммунной реакции организма — воспалению. Следовательно, их динамика отражает реакцию организма на чужеродные клетки — инфект. Анализ лейкоцитов периферической крови, по существу, есть оценка состояния иммунной системы человека, его иммунного статуса. Однако с самого начала и до последнего времени иммунологи не признавали клинический анализ ядерных клеток крови «своим», не считали, что он дает оценку иммунной реакции организма на инфект. Поэтому вам не удастся найти ни одной книги по клинической иммунологии, в которой бы присутствовал раздел или глава, посвященная анализу динамики клеток крови в процессе воспаления. Зато гематологи, к чьей епархии по традиции относят анализ крови, считают его «своим» и полноценно используют для выяснения и диагностики различных лейкопролиферативных и лейкодефектных патологий. Впрочем, и они фактически упускают его значимость для оценки работы иммунной системы при воспалительном процессе (да этого им и не требуется). В учебниках по гематологии основы динамики лейко-граммы при инфекционных и воспалительных заболеваниях стали описывать все реже, а в последние годы их вообще упускают.

Что это — закономерный процесс отмирания ненужного, которым в данном случае, возможно, является оценка хода воспалительного процесса по анализу крови, или досадная нелепость, стечение обстоятельств, которое привело к огромной потере для клиники — утрате врачами возможности использования простейшего анализа для прогнозирования течения воспаления?

Практика показывает, что верно последнее. Причины же утери интереса к анализу клеток крови как индикатору работы иммунной системы кроются в противоречивой истории становления этого метода, сочетающейся с коллизиями в течение векового развития иммунологии.

Хотя открытие в крови наряду с безъядерными эритроцитами ядросодержащих клеток крови (белых кровяных шариков, как их называли раньше, или лейкоцитов, как их называют теперь) относят к концу XVIII в., реальная методическая разработка изучения этих клеток относится к 1874 году. Тогда молодой Пауль Эрлих, будущий великий иммунолог, смешал анилиновые красители (метиловый зеленый, кислый фуксин и оранжевый) и полученной краской (которую он назвал триацид) окрасил фиксированный мазок крови. В результате на мазке удалось четко различить несколько типов лейкоцитов: гранулоциты, лимфоциты и мононуклеары. Кроме этого, ученому удалось увидеть три типа гранулоцитов: базофилы, оксифилы (ныне их называют эози-нофилами) и нейтрофилы. Они различаются по характеру окраски гранул в цитоплазме этих клеток и отличаются сродством к определенному красителю. Таким образом, были выявлены типы лейкоцитов крови, появилась возможность оценки их соотношения в мазках (лейкограммы).

Началось интенсивное изучение лейкограммы при различных инфекциях и других заболеваниях человека. Обширный материал, собранный разными исследователями в клинике, указывал на то, что каждому этапу воспаления соответствует определенное количество и соотношение лейкоцитов в периферической крови.

Динамика изменения показателей лейкограммы зависит от типа воспаления. В 1891 г. вышел труд, обобщающий эти исследования. Было сделано заключение о важности исследования состава (формулы) лейкоцитов при инфекционных и воспалительных процессах для диагностики, а также объективной оценки и прогнозирования течения заболеваний. Вдобавок к этому стало ясно, что целый ряд патологий связан с извращенным образованием лейкоцитов того или иного типа. Поскольку было выявлено, что многие из этих заболеваний сопровождаются резким повышением содержания в крови лейкоцитов, им было дано название — белокровие.

Сейчас группу этих заболеваний чаще называют лейкозами, причем в зависимости от поврежденного клеточного звена и характера течения процесса различают лимфолейкоз и миелолейкоз, острый и хронический лейкозы и т. д.

В последнем десятилетии прошлого столетия окраска клеток крови была усовершенствована. Это удалось сделать благодаря подбору более эффективных методов фиксации клеток, выбору и составлению оптимальных сочетаний анилиновых красителей. Этот этап связан с именами Гимза, Романовского, Максимова и других.

В начале XX в. появилось множество модификаций методов окраски клеток. Предлагались все новые и новые способы подсчета окрашенных клеток с учетом их мельчайших особенностей, разрабатывались методы обработки результатов.

Наиболее важным было предложение дифференцировать лейкоциты по степени их зрелости, выражающейся в изменении структуры ядра (Арент, 1912). В настоящее время из этого предложения в повседневной практике используется лишь анализ степени зрелости нейтрофилов — известный всем сдвиг ядер нейтрофилов влево и вправо. Однако в то время школа Арента считала необходимым иметь в лейкограмме 81 критерий, в число которых входили показатели, подробно отражающие сдвиг ядер клеток каждого типа. Анализ крови стал включать в себя множество показателей, и ученые наперебой доказывали практическую важность и необходимость каждого из них. Что оставалось делать в этой ситуаций практическому врачу, который был просто не в состоянии определить столь большое количество информации да еще проанализировать ее у постели больного? Такой поток сведений об анализе крови мог вполне захлестнуть и утопить все содержащееся в нем рациональное, оставив лишь воспоминания о методе в истории развития медицины. Мог бы, как это уже бывало во врачевании не раз, если бы не нашлись исследователи, приложившие колоссальные усилия, чтобы сделать анализ крови доступным для практических врачей.

В 20-е годы нашего века Виктор Шиллинг, проведя кропотливые исследования, показал, что для окрашивания мазков крови лучшей является краска Романовского—Гимза. При этом лучший способ фиксации — выдерживание мазка в метиловом спирте. Из множества известных показателей он оставил в анализе клеток крови всего 8, доказав, что именно они являются клинически наиболее информативными. Такое упрощение и стандартизация схемы изучения лейкограммы впервые дали возможность широкого внедрения ее в клиническую практику.

На основании всего накопленного опыта Шиллингу впервые удалось сформулировать основные закономерности динамики лейкограммы в течение воспалительного процесса и общие законы ее интерпретации в клинике. И вот начиная с 30-х годов нашего века лейкограмма стала одним из основных методов анализа крови в руках клинициста. Она используется для диагностики воспалительных и лейкопролиферативных заболеваний, а главное — в качестве объективного критерия для контроля течения воспалительного процесса и составления прогноза его развития. С тех пор фактически не менялся ни подход к ее интерпретации, ни метод определения лейкограммы. Правда, принципы прогнозирования течения воспалительного процесса с использованием иммунограммы были несколько забыты. Да еще в 60—70-е годы были разработаны и предложены практикам автоматические счетчики клеток крови, дающие возможность определять лейкограмму быстро и с высокой точностью. Однако они не продвинули вперед развитие анализа лейкоцитов коови. И не только потому, что не заменили традиционного подсчета лейкограммы в мазке при помощи светового микроскопа, который до сих пор используется как единственный метод в большинстве лабораторий, но и потому, что это техническое усовершенствование ничего, по сути, к лейкограмме не добавило.